猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒 Indirect ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody
使用说明书
【简 介】
试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成，利用间接ELISA方法检测猪血清中存在
的猪瘟特异性抗体，从而对猪瘟疫苗免疫效果作出评价。
【用 途】
适用于猪瘟疫苗的免疫后评价及未免疫猪的血清学诊断。
【原 理】
本试剂盒利用猪瘟病毒的两种主要特异性抗原组成的混合抗原包被微孔板。在试验中，若待测血清样品中含有相应的抗体，则将与检测板上抗原结合,形成抗原-抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合，并可使TMB底物溶液形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色，最终通过测定450nm波长下吸光度得到结果。
【试剂盒主要成分】
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1 抗原包被板
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2块 96孔/块
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2 阴性对照血清
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1管 50µl/管
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3 阳性对照血清
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1管 50µl/管
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4 酶标二抗
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2管 0.2ml/管
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5 25倍浓缩洗涤液
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1瓶 25ml/瓶
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6 底物溶液A
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1瓶 10ml/瓶
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7 底物溶液B
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1瓶 10ml/瓶
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8 终止液
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1瓶 10ml/瓶
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9 样品稀释液
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2瓶 30ml/瓶
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10血清稀释板
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2块 96孔/块
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11说明书
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1张
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【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【试剂配制】
使用前，试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温（25˚C左右）。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作25倍稀释，稀释好的洗涤液在2～8˚C可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释，现配现用。
【样品稀释】
标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释（推荐稀释方法：245µL样品稀释液中加5µL
待检血清样品）。
【操作步骤】
1、取抗原包被板，先加入50µL样品稀释液，再将稀释好的待检样品和对照样品各取50µL加入到抗原包被板孔中，用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔，置37˚C温育30分钟。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀释好的酶标二抗100µL，置37˚C温育30分钟。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µL，静置1分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A 与底物溶液B 100µL ，避光显色10分钟。
6、每孔加终止液50µL，10分钟内测定450nm波长吸光度。
【结果判定】
农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知中明确指出，猪瘟抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为合格。根据该通知制定结果判定标准：
1 实验结果同时满足下列条件，方为有效：
标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定：
样品OD450nm≤0.3，判为猪瘟抗体阴性。
样品OD450nm＞0.3，判为猪瘟抗体阳性。
样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。
3 对猪瘟病毒免疫保护力检测结果的判定：
样品OD450nm≤0.3，判为无保护力，所检样品对猪瘟病毒感染无保护力。
样品OD450nm介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，样品抗体水平较低，对流行毒株有一定保护力。
样品OD450nm≥0.6，判为有保护力，所检样品抗体水平较高，在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。
样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02两个临界值范围内，建议重复检测，以确保结果准确。
【注意事项】
1 本底过高可导致结果整体水平偏高，实验过程需保证二抗清洗干净，或实验中添加空白对照。
2 环境温度低于15˚C可导致结果整体水平偏低，实验过程需保证环境温度尽量接近25˚C，或适当延长底物液显色时间。
3 底物液A和底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
4 浓缩洗涤液用去离子水稀释，如果发现有结晶，应水浴加热使其溶解。
5 酶标二抗应现配现用。
6 4˚C过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。
【贮 存】 2～8˚C避光保存
【有 效 期】 9个月
【生产企业】 重庆澳龙生物制品有限公司
【地 址】 重庆市荣昌县昌元镇昌州大道东段板桥四支路3-03
【邮 编】 402460
【技术服务】 023-85261707
【销售热线】 023-85261703（传真）
