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羊棘球蚴(包虫)病ELISA抗体检测试剂盒

羊棘球蚴(包虫)病ELISA抗体检测试剂盒

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详细信息
羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒    Indirect ELISA Kit For Echinococcus Granulosus 
 
使用说明书
【简 介】
  试剂盒由抗原包被板、血清稀释板、酶标二抗及其它试剂制成,应用间接ELISA法检测羊血清中抗羊棘球蚴(包虫)主要保护性抗原Eg95蛋白的抗体。
【用 途】
  适用于养殖场及检验机构对羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗免疫效果的评价。
【原 理】
  本试剂盒是采用棘球蚴主要保护性抗原EG95包被微孔板。在试验中,若待测血清样品中含有抗棘球蚴的特异性抗体,则将与检测板上抗原结合形成抗原—抗体复合物。之后加入的酶标二抗将与检测板上的抗原—抗体复合物发生特异性结合,再加入TMB底物溶液后形成蓝色产物。显色反应经终止液终止后呈黄色,最终通过测定450nm波长下吸光度即可得到结果。
【试剂盒主要成分】 

抗原包被板                  

2                            96孔/

阴性对照血清   

1                            50μl /管

阳性对照血清    

1                            50μl /管

酶标二抗   

2管                            0.2ml/

5 25倍浓缩洗涤液     

1                            25ml/瓶

底物液A          

1                            10ml/瓶

底物液B         

1                            10ml/瓶

终止液            

1                            10ml/瓶

样品稀释液    

2                            30ml/瓶

10血清稀释板      

2                            96孔/

11说明书               

1

 
【样品制备】
  取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
【试剂配制】
  使用前,试剂盒内除酶标二抗外的各种试剂都应恢复到室温(25˚C左右)。25倍浓缩的洗涤液恢复至室温或略微加热后摇动使沉淀的盐溶解,然后用去离子水作25倍稀释,稀释好的洗涤液在2~8˚C可以存放7天。酶标二抗在使用前用样品稀释液按1:100倍稀释,现配现用。
【样品稀释】
  标准样品与待检样品均在血清稀释板中按1:50倍的体积稀释(推荐稀释方法:245µL样品稀释液中加5
待检血清样品)。
【操作步骤】 
1、取抗原包被板,先加入50µL样品稀释液,再将稀释好的待检样品和对照样品各取50µL加入到抗原包被板孔中,用移液器轻轻吹打混匀。阴性对照和阳性对照各设2孔,置37˚C温育30分钟。
2、甩掉板中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液200µL,静置1分钟倒掉,再在吸水纸上拍干,共洗3次。
3、每孔加入稀释好的 酶标二抗100µL,置37˚C温育30分钟。
4、甩掉板中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液200µL,静置1分钟倒掉,再在吸水纸上拍干,共洗3次。
5、每孔加入等体积混合好的底物溶液A 与底物溶液B 100µL ,避光显色10分钟。
6、每孔加终止液50µL,10分钟内测定450nm波长吸光度。
【结果判定】 
  参考农业部关于印发《2013年国家动物疫病强制免疫计划》的通知,被检抗体正向间接血凝实验抗体效价≥25为阳性。根据该通知制定结果判定标准:
 
1 实验结果同时满足下列条件,方为有效:
标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 疫苗免疫后抗体水平检测结果的判定:
样品OD450nm≤0.3,判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阴性。
样品OD450nm>0.3,判为细粒棘球蚴(包虫)抗体阳性。
样品OD450nm处于0.3±0.02临界值范围内,建议重复检测,以确保结果准确。
3 对细粒棘球蚴(包虫)免疫保护力检测结果的判定:
样品OD450nm≤0.3,判为无保护力,所检样品对细粒棘球蚴(包虫)感染无保护力。
样品OD450nm介于0.3与0.6之间,判为保护力低下,抗体水平较低,对细粒棘球蚴(包虫)感染有一定保护力。
样品OD450nm≥0.6,判为有保护力,所检样品抗体水平较高,在攻毒试验中可提供高于90%的抵抗力。
样品OD450nm处于0.3±0.02或者0.6±0.02两个临界值范围内,建议重复检测,以确保结果准确。
 
【注意事项】
1  本底过高可导致结果整体水平偏高,实验过程需保证二抗清洗干净,或实验中添加空白对照。
2  环境温度低于15˚C可导致结果整体水平偏低,实验过程需保证环境温度尽量接近25˚C,或适当延长底物液显色时间。
3  底物液A和底物液B不要暴露于强光,避免接触氧化剂。 
4  浓缩洗涤液用去离子水稀释,如果发现有结晶,应水浴加热使其溶解。
5  酶标二抗应现配现用。
6  4˚C过夜孵育样品及酶标二抗可以获得更好的结果。
 
【贮  存】  2~8˚C避光保存 
【有 效 期】  9个月
【生产企业】  重庆澳龙生物制品有限公司
【地  址】  重庆市荣昌县昌元镇昌州大道东段板桥四支路3-03      
【邮  编】  402460
【技术服务】  023-85261707                
【销售热线】  023-85261703(传真)
 
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